Fue la esposa del presidente Juan Domingo Perón y, por lo tanto, ostentó el título de primera dama desde 1946 hasta su muerte en 1952. Significó una figura distinguida del movimiento político conocido como peronismo en las décadas de 1940 y 1950, y una importante activista de derechos humanos. Luchó activamente contra la oligarquía representada por los grandes terratenientes, la pobreza y la desigualdad económica, y por los derechos de los trabajadores, los ancianos, los niños, las mujeres y los vulnerables.
Su imagen ha causado una gran controversia en Argentina: los golpes militares que siguieron al primer y segundo mandatos del peronismo prohibieron toda mención de ella durante veinte años, y todavía hoy despierta pasiones extremistas.
Personificó el ideal de servicio público, se dedicó a tareas más allá de las estipuladas por el ceremonial y llegó a ser conocida como «la abanderada de los humildes».  En 1935, a los 15 años, se mudó a Buenos Aires con la intención de convertirse en actriz. Después de varios años de gran pobreza, se dio a conocer en el mundo de la actuación, y para 1943, se había convertido en la actriz de radio mejor paga de Argentina.
También se sumergió en la política en esa época, cuando comenzó a participar en el sindicalismo: el 3 de agosto de 1943, fue una de las fundadoras del primer sindicato de trabajadores de radio. Conoció a su esposo, Juan Domingo Perón, en un evento benéfico celebrado el 22 de enero de 1944 y se casaron al año siguiente.
Tras las elecciones generales de 1946, Juan Perón fue elegido presidente de Argentina y, durante los seis años siguientes, el poder de Eva Perón creció drásticamente. Entre otras cosas, dirigió algunas áreas del Ministerio de Trabajo y Salud, y creó la Fundación Eva Perón para distribuir asistencia social durante la era peronista.   
Falleció debido a un cáncer de cuello uterino a los 33 años. Antes de su muerte, en 1952, recibió el título oficial de «Jefa Espiritual de la Nación» es la única argentina que ha recibido esta designación hasta la fecha,  y en 2010, fue nombrada «Mujer del Bicentenario» de Argentina.